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猪带绦虫45W基因家族cDNA克隆和序列分析
猪带绦虫 45W基因 cDNA
2008/8/22
根据猪带绦虫45W基因序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对六钩蚴总RNA进行cDNA扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离、纯化、回收,与载体pGEMT-easyVector连接,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,测序。结果显示,已成功克隆到重要保护性抗原45W基因B型转录本cDNA,完整开放阅读框(ORF)的大小为459bp。序列同源性分析与比较表明,所获得的9个B型转录本c...
伊氏锥虫HGPRT基因cDNA的克隆及其在E.coli中的表达。
在无RNase污染的环境下，提取柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）子孢子RNA，进而纯化mRNA，采用Oligo（dT）引物反转录合成cDNA第一链和第二链，并在其两端加EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装，形成完整的噬...
应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库
LD-PCR 大片吸虫 cDNA表达文库
2008/4/7
为构建大片吸虫成虫cDNA表达文库，用Trizol试剂提取大片吸虫成虫总RNA，经反转录合成cDNA第一链，应用LD-PCR扩增方法，合成双链cDNA。用SfiⅠ内切酶修饰此双链cDNA，使形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的黏性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化，收集400 bp以上的双链cDNA片段，将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体，经体外包...
采用Tripure Isolation Reagent抽提猪蛔虫雄虫成虫的总RNA，用poly(A)PuristTM纯化试剂盒分离mRNA。分离mRNA后，用Clontech公司的CreatorTM SMARTTM cDNA文库构建试剂盒构建了猪蛔虫雄虫成虫的cDNA文库。结果获得了7.26 × 105独立克隆，重组率达96.7%，插入片段的平均长度约为1 kb。猪蛔虫雄虫cDNA文库的成功构建为...
应用cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因的研究
猪蛔虫 cDNA微阵列芯片 性别特异基因 表达谱分析
2008/4/2
采用cDNA微阵列芯片技术,从所构建的猪蛔虫雌、雄成虫cDNA消减文库分别挑取1 044和1 119个克隆，PCR扩增其插入片段，经纯化后点样于预先处理好的基片上（双点杂交），制备成cDNA微阵列芯片。将分别标记荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的雌虫和雄虫cDNA探针，与制备好的cDNA芯片杂交（平行进行反标杂交试验）。根据每个点杂交后的Ratio值，筛选出双点杂交和正反标中都同时具有表达...