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马立克病病毒（MDV）是少数感染自然宿主后可诱发淋巴瘤的疱疹病毒之一，是研究肿瘤发生及发展的理想动物模型。目前已报道MDV可编码数十种miRNA，其中MDV-1编码的miR-M4-5p被鉴定为宿主细胞miR-155的同源物，由于miR-155与人类多种肿瘤性疾病密切相关，这意味着miR-M4-5p可能在MDV的致瘤过程中扮演重要角色。本研究旨在构建miR-M4-5p的宿主靶基因文库并进行初步鉴定。...
莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA表达文库的构建及免疫学筛选
莫斯巴贝斯虫 cDNA表达文库 免疫筛选 RACE
2013/11/29
为了构建莫氏巴贝斯虫（Babesia motasi）裂殖子cDNA表达文库，从中筛选和鉴定功能基因，利用差速离心法从莫氏巴贝斯虫感染的红细胞中纯化裂殖子，提取总RNA并纯化mRNA。在合成的双链cDNA两端加上含EcoRⅠ和Hind Ⅲ定向接头后连接到λ SCREEN载体上。通过体外包装形成完整的噬菌体颗粒，并用之转染ER1647，构建莫氏巴贝斯虫裂殖子的cDNA表达文库。用莫氏巴贝斯虫阳性血清筛...
以经产荷斯坦奶牛外周血白细胞为材料，分离Poly(A)+ RNA，反转录合成单链及双链cDNA，经酶切成平均大小为400~600 bp的片段，将患乳房炎奶牛cDNA分成2组，分别与2种不同的接头连接，再与健康奶牛cDNA进行2次消减杂交和2次抑制性PCR扩增，将第2次PCR产物与pGEM-T载体连接，转化大肠杆菌TOP10感受态细胞进行文库扩增，构建了具有高消减效率的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库...
猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建及免疫原基因的筛选与克隆
六钩蚴 cDNA文库 免疫筛选 基因克隆
2008/4/2
研究避开庞大的猪带绦虫基因组DNA，以构建六钩蚴发育阶段的cDNA表达文库为策略，利用pSPORT 1质粒表达载体首次成功构建了表达文库。经库容量、重组率和代表性测定，库容量达5.0×106，重组率100%，用特异性引物能扩增出六钩蚴发育阶段10 ku基因、18 ku基因和45W基因家族的A型、B型、C型转录本，说明文库质量高，代表性强。应用快速筛选质粒表达文库和克隆免疫原基因的技术，成功地筛选和...