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中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组构建一种自我剪切的诱导型Cre重组酶实现可控性高效遗传操作（图）
中国科学院生物化学与细胞生物学研究所 周斌 自我剪切 诱导型Cre重组酶 可控性 高效遗传操作
2020/2/20
2020年2月17日，国际学术期刊The EMBO Journal以封面文章在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（生物化学与细胞生物学研究所）周斌研究组的最新科研成果“Generation of a self-cleaved inducible Cre recombinase for efficient temporal genetic manipulation”。该研究构建了一种新的诱导...
来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre，已成为一种新的DNA操作的有用工具，在体内外都获得了成功的应用.为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD908株中，tetR-loxP-neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD908株的△aroC位点中.构建一Cre酶表达受启动子PLtetO-1控制的自杀质粒pJG9/Cre，以切除CVD908株△aroC中同向loxP序列之间的n...
Cre/LoxP位点特异重组酶系统已发展为在体内外进行遗传操作的一个新的有力工具.该系统在转基因小鼠上的应用，可使转基因的表达或靶基因的缺失/突变的位点特异DNA重组不仅发生在小鼠发育的某一阶段或特定的组织器官,而且,若与控制Cre表达或功能的诱导系统结合，则可以时空方式体现.这些基于重组的策略可能对基因功能的研究和人类疾病的动物模型的建立产生深刻影响.
干扰素诱导Mx-Cre转基因小鼠表达的重组酶活性的体外检测
位点特异性重组 重组酶 转基因小鼠 体外检测
2008/2/2
摘要利用PCR、Westemblot、免疫组化、免疫金标电镜、Southemblot从DNA水平、蛋白水平分析干扰素诱导后Mx-Cre转基因小鼠肝组织中Cre重组酶的表达及其表达产物的活性。在对Mx-Cre转基因小鼠基因组中整合有cre基因进行确定后,通过干扰素诱导Mx-Cre转基因小鼠表达Cre重组酶,结果表明转基因小鼠肝细胞核和细胞质中均有Cre重组酶的表达,并在超微水平进一步证实。将含表达的...
血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立
Tie2 血管内皮细胞 Cre-loxP 转基因小鼠
2008/1/30
摘要血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能,创建了Tie2-Cre转基因小鼠，利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和Southern Blot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因，整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布，...
软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制和鉴定
Cre 转基因小鼠 软骨 组织特异性
2008/1/29
摘要构建了含有软骨组织特异性Ⅱ型胶原A1启动子和Cre重组酶基因的转基因载体pcol2A1-Cre。323枚小鼠受精卵经显微注射引入转基因片段后,分别移植至14只假孕母鼠的输卵管使其发育。共得到仔鼠52只,PCR鉴定结果显示其中10只小鼠基因组上有Cre基因的整合,整合率为19.2%。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上携带LoxP位点的条件基因打靶小鼠交配,以检测Cre酶介导的重组及其组织特...
摘要 利用从129sv小鼠基因组文库克隆得到的1.8 kb的胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）基因的5ˊ端调控序列，构建了含有2个β珠蛋白绝缘子、GFAP 5ˊ端调控区、Cre基因和人生长激素基因(hGH)polyA的转基因载体pGFAP-Cre-hGH。以显微注射的方法将7.6 kb的转基因片段pGFAP-Cre-hGH引入191枚小鼠基因组受精卵，其中176枚分别移植至8只假孕母鼠的输卵管中...
角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立
Cre 转基因小鼠 皮肤 组织特异性
2008/1/23
构建了含有角质细胞特异性角质素5启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pK5-Cre-hGH。以显微注射的方法将4.2 kb的转基因片段K5-Cre-hGH引入小鼠基因组，共注射720枚受精卵，其中695枚移植至29只假孕母鼠的输卵管中发育，获得子代小鼠48只，经基因型鉴定有12只小鼠在其基因组上整合有Cre基因，整合率为25%。将带有Cre重组酶基因的小鼠与基因组上携带l...
Mx-cre转基因小鼠品系的建立及其培育
Cre基因 转基因小鼠 DNA印迹
2008/1/21
摘要将携带MX启动子调控的Cre基因真核表达载体pMx-cre线性化后，通过受精卵显微注射途径制备转基因小鼠。共注射99个卵，产仔20只，利用PCR对小鼠进行筛选，以基因组Southernblot确证，最后得到一个阳性的小鼠品系，进而将其保种和扩大繁殖。
成骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立
成骨细胞特异性表达 Cre重组酶转基因 小鼠
2007/12/6
摘要：构建了含有骨钙素基因启动子、Cre重组酶基因和人生长激素基因polyA的转基因载体pOC-Cre-hGH。以显微注射的方法将4.6 kb的转基因片段OC-Cre-hGH导入小鼠受精卵。16只子代小鼠中，经PCR和Southern杂交鉴定有2只小鼠携带外源基因，整合率为12.5%。为了检测OC-Cre在转基因小鼠中表达的组织特异性，将转基因首建者小鼠与基因组上携带有LoxP位点的Smad4条件...
基于Cre重组酶体系的鸡卵清蛋白基因打靶载体的构建
2007/8/5
摘要：利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线。为建立基于Cre/Loxp系统的鸡卵清蛋白基因（Ovalbumin gene，OV）位点的双交换打靶载体系统，本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段，并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66，一起构建了含有Hsv-tk负筛选标记...