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兔出血症重组抗原间接ELISA试剂盒研制及应用
兔 出血症 重组抗原间接ELISA试剂盒
2008/10/16
RHDV属杯状病毒科，VP60蛋白是其唯一的结构蛋白，也是免疫原性蛋白。在昆虫细胞-杆状病毒系统中表达的VP60蛋白可以自我组装成病毒样颗粒（virus-like particles，VLPs），其在结构、免疫原性和抗原性上与自然病毒颗粒十分相似，采用生物技术手段，利用现有资源，将昆虫细胞中表达的重组VP60蛋白作为诊断抗原，建立间接ELISA检测方法，筛选反应试剂，优化反应条件，组装试剂盒，满足...
奶牛结核病间接ELISA检测方法的研究
结核病 奶牛 ELISA重组 多抗原
2008/10/8
该项目属于应用技术研究领域，适用于由牛分枝杆菌和结核分枝杆菌引起的动物结核病的快速检测。该研究利用spliced by overlap extension (SOE)技术，PCR扩增牛分枝杆菌抗原mpb70、mpb83和esat-6的三串联基因mpb70-83-e6，分子克隆和重组表达了融合蛋白M70-83-E6，并以此作为诊断抗原，通过对ELISA各项反应条件的优化，建立了特异、敏感的间接ELI...
精喹禾灵酶联免疫吸咐分析（ELISA）研究
精喹禾灵 半抗原 多克隆抗体 IC-ELISA
2008/9/24
【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸，并与载体蛋白BSA和OVA偶联，分别合成了免疫抗原和包被抗原，偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BSA免疫兔子获得多克隆抗体。【结果】抗血清的效价为200 000。经酶联免疫吸附反应分析（ELISA）测定，精喹禾灵的抑制中浓度（IC50）为0.0349...
成功亚克隆了口蹄疫病毒（FMDV）太保毒株3ABC中VPg2基因，并将其插入pGEX-4T-1表达载体构建重组表达质粒，Western blotting分析表明，表达的VPg2蛋白与FMDV阳性血清发生反应。以VPg2表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法，对背景清楚的试验牛血清进行检测，结果VPg2表达蛋白与空白对照组（C组）和灭活疫苗反复免疫组（CI组）牛血清均不发生反应，与未免疫直接攻毒组（D...
应用BA－ELISA法检测结核病牛血清中抗体的研究
牛 血清结核病 BA-ELISA法
2008/9/10
本研究课题通过引入生物素－亲和素－酶复合物酶联免疫吸附试验，检测牛血清中结核抗体存在情况，为进一步研究结核病病理及找新的敏感性高、特异性强、节省人力、物力的诊断方法提供依据。试验总结了前人的经验，用295头份牛血清，进行了BA－ELISA、ELISA检测，并进行了特异性、稳定性等对比试验，结蜾表明BA－ELISA法优于ELISA法和PPD皮变反应。可作为目前广泛应用的PPD皮变反应的辅助诊断方法。...
【目的】丝状支原体丝状亚种SC（Mycoplasma mycoides subsp mycoides SC，MmmSC）是引起牛传染性胸膜肺炎（contagious bovine pleuropneumonia，CBPP）的病原体。成熟的脂蛋白LppQ N端是亲水性的，在自然感染和人工感染时，特异性免疫反应产生早，持续时间长，抗体滴度高，因此有理由相信脂蛋白LppQ N端片段将有可能成为一种理想的...
根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析...
猪繁殖与呼吸综合征ELISA诊断试剂盒的研究
试剂盒 ELISA猪 繁殖与呼吸综合征 N蛋白表达抗原
2008/8/1
新产品知识产权形式：项目合作方式：技术服务成果完成单位：中国动物卫生与流行病学中心成果摘要： 该课题为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)间接ELISA试剂盒的研发。该课题通过克隆了PRRSV核衣壳蛋白基因，与野生型杆状病毒共转染sf9细胞表达了PRRSV蛋白质；对重组杆状病毒在大批量生产工艺方面进行了研究，证明重组杆状病毒非常稳定。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原，对各种条件进行优化，建立了检测PRR...
将常山酮进行人工改造，制备了半抗原常山酮琥珀酸衍生物（Hal-suc）。采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联，制备免疫原和包被原。动物免疫6次后采血制备抗血清，以间接ELISA法测定血清效价，测得抗血清的最佳工作浓度为1∶102 400。建立了常山酮在鸡肝脏和肌肉组织中检测的ELISA法，该方法在50、100、500 ng/g 的添加浓度水平下，...
用大肠杆菌表达的FMDV NSP 3ABC经纯化复性后作为抗原，建立了鉴别感染动物与注苗动物的间接ELISA方法。用该方法检测了大量的牛血清样品，确定了3ABC－I－ELISA判定标准。3ABC－I－ELISA以（OD样品－OD阴性）÷（OD阳性－OD阴性）来计算待测样品效价。当效价小于0.2为阴性，介于0.2～0.3之间为可疑，大于0.3为阳性。根据此判定标准所测试验感染动物血清都为阳性，敏感性...
基于重组Erns蛋白的猪瘟ErnsELISA的建立和优化
猪瘟 Erns-ELISA 鉴别诊断
2008/4/7
将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组Erns蛋白经纯化后作为包被抗原，建立了检测猪瘟抗体的Erns-ELISA方法。经优化试验，确定了最适抗原包被量为0.15 μg；血清最适稀释度为1∶100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明，建立的Erns-ELISA简便、特异、稳定，与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7%，与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77.5%。可以用于猪瘟...
利用新孢子虫体外重组表面蛋白dNcSRS2蛋白作为包被抗原，对各项条件进行优化，确定判定标准，建立了检测新孢子虫血清抗体的间接ELISA方法。经对多例血清检测表明，所建立的诊断试剂盒重复性好、特异性强、灵敏度高，与进口的IFAT及两种商品化ELISA试剂盒的检测结果相比较，符合率均达到92％以上。应用建立的ELISA方法对236份奶牛血清的新孢子虫抗体进行检测，阳性率为22%。这是国内首次利用重组...