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为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒(ALV)的简易方法,作者使用A亚型(ALVA)、C亚型(ALVC)以及2株J亚型(ALVJPY和ALVJWS)鸡白血病病毒(ALV)按高、中、低(即100、10、1 μL)3种接种量人工接种DF1细胞,在接种后不同时间用A、B、C 3种ELISA试剂盒检测ALV抗原(P27)。结果表明,对ALVA和ALVJPY,高剂量...
鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立
鹿血 ELISA 多克隆抗体
2011/8/16
通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性...
为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒(ALV)的简易方法,作者使用A亚型(ALVA)、C亚型(ALVC)以及2株J亚型(ALVJPY和ALVJWS)鸡白血病病毒(ALV)按高、中、低(即100、10、1 μL)3种接种量人工接种DF1细胞,在接种后不同时间用A、B、C 3种ELISA试剂盒检测ALV抗原(P27)。结果表明,对ALVA和ALVJPY,高剂量...
抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法的建立
猪肺炎支原体 IgA 间接ELISA
2009/11/3
为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测,作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法。在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后,选择后者作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgGHRP作为酶标三抗,并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化。最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接EL...
采用RT PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET32aPG 转化BL21(DE3),经1.0 mmol·L1 IPTG 诱导,外源基因获得高效表达。通过Westernblot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的...
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX4T3env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDSPAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原, 建立了检测REV抗体的间接ELISA方法...
重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究
刚地弓形虫 rMIC3 ELISA 检测
2010/1/7
[目的]探讨检测猪弓形虫病的新方法。[方法]应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3(rMIC3)作为包被抗原建立间接ELISA 方法,用于猪弓形虫抗体的检测。[结果]该法所用最佳抗原浓度为3.40 μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1〖DK〗∶160,与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应,与LAT的符合率为92.56%。[结论]该方法快速、特异、重复性好,可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。
猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用
猪水肿毒素 单克隆抗体 单抗竞争ELISA 抗体检测
2009/9/8
本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为032 μg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1∶2,酶标单抗工作浓度为1∶3 200,血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同...
应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性,适合Asia1型猪口蹄疫病毒抗体的监测。
鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用
氟苯尼考 残留检测 间接竞争ELISA
2009/8/31
【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102 400。最佳包...
Preparation of Monoclonal Antibody Against Chicken Apolipoprotein B and Development of Enzyme Liked Immunosolvent Assay (ELISA) Method with the Antibody Aiming at the Optimization of Lipid Metabolism in Chickens
apolipoprotein B monoclonal antibody enzyme linked immunosorbent assay fat deposition broiler chickens
2009/7/31
Apolipoprotein B (apoB) containing lipoproteins are major lipoproteins in blood and the elevated concentration in plasma may lead to increased transport of lipoproteins into adipose tissues resulting ...
以合成肽为抗原检测O型口蹄疫病毒抗体ELISA方法的建立和评价
FMDV 抗体 ELISA 合成肽
2010/1/29
作者以固相法合成特异性FMDV主要保护性抗原VP1上的表位肽,将其与载体蛋白BSA偶联,作为包被抗原,制备检测抗O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。结果表明该方法的敏感性为95.12%,特异性为100%。检测199份血清标本,与UBI FMD VP1 试剂盒的符合率达到98.49%,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达到96.98%。该多肽ELISA试剂盒特...
奶牛孕酮间接竞争ELISA检测方法的建立
奶牛孕酮 间接竞争ELISA 定量检测
2009/6/16
[ 目的] 为孕酮检测试剂盒的研制奠定基础。[ 方法] 采用二环己基碳化二亚胺法制备检测抗原, 建立了检测奶牛孕酮含量的间接
竞争ELISA 方法。[ 结果] 检测奶牛孕酮的间接竞争ELISA 的最佳反应条件确定为: 最佳包被浓度为100 ng/ ml , 碳酸盐缓冲液的包被效果较好, 以4 ℃过夜+ 37 ℃ 2 h 佳, 最佳封闭液为2% 山羊血清, 酶标抗体的工作浓度为0 .13 μg/ ...
牛乳铁蛋白直接竞争ELISA 检测法的建立
牛乳铁蛋白 cELISA 定量检测
2009/6/16
[ 目的] 建立一种检测牛乳铁蛋白( LF) 含量的竞争ELISA 检测方法。[ 方法] 制备鼠抗牛LF 单克隆抗体, 采用直接竞争ELISA 测定
酶标记物效价, 建立牛LF 的直接竞争ELISA 检测方法。[ 结果] 纯化后, 制备的鼠抗牛LF 单抗效价达1∶1 280 000 , 且鉴定为IgG1 。该单抗对牛乳铁蛋白具有很强的特异性。制备酶标单抗的效价为1∶640 000 。抗原包被物和...
从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDSPAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表...